U okviru zbirki Rim i Vizantija zastupljeni su brojni predmeti koji potiču sa teritorije Niša i okoline. Oni svedoče o svakodnevnom životu, privredi, ekonomiji, umetnosti, arhitekturi, kultu i religiji stanovnika koji su živeli na ovom prostoru u periodu od I do VI veka.
S područja Niša potiče nekoliko remek-dela antičke umetnosti: bronzani portret Konstantina Velikog, srebrni tanjiri rađeni povodom Licinijevih decenalija, bronzani portret carice Teodore, porfirni portret diarha, bronzana statueta Jupitera na prestolu i bronzana ograda sa hermama. Najreprezentativniji predmeti iz antičke zbirke izloženi su na stalnoj arheološkoj postavci.